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斑點酶聯免疫吸附測定方法DELISA間接法程序
更新時間:2015-05-20   點擊次數:902次

ELISA試劑盒程序
(1) 壓跡:根據樣品的數量剪取一片硝酸纖維素膜或混合纖維素膜。用直徑3~5mm圓形打孔
器(瓊脂平板打孔器),在膜的光滑面按順序壓上痕跡,作為點樣部位。將膜置蒸餾水中浸泡,待*浸濕后,取出室溫自然干燥。
(2) 點樣:用微量移液器分別吸取1~2μl(或用玻璃棒、毛細管蘸一滴)被檢抗原液,滴于
圓圈內,自然干燥。為增加抗原吸附量,也可在點樣干燥后,再進行第二次點樣。同時作陰、陽性抗原對照。
(3) 封閉:將膜置平皿或小池內,加入封閉劑,37℃浸泡30~60min。取出稍置片刻,用洗液漂洗2次,晾干。
(4) 與AFMcAb或OFPcAb反應:用保溫液對AFMcAb或OFPcAb作適當稀釋,加入反應池中,于37℃覆蓋膜2h。
(5) 洗滌:用洗滌液漂洗膜3次,每次3min,晾干。
(6) 與酶結合物反應:凍干辣根過氧化物酶標記兔抗BALB/c鼠抗體用保溫液作1∶80稀釋,37℃覆蓋膜1h。
(7) 洗滌:3次,方法同上。
(8) 顯色:將膜浸入底物溶液中,避光染色5~15min。
(9) 終止反應:用蒸餾水漂洗濾膜,晾干。
3 結果判定在陰、陽對照正常情況下,以在膜圓圈內出現棕色斑點為陽性,無色為陰性。膜干燥后,可長期保存。
在應用D4 注意事項
1 點樣量不易過大,以免溢出壓跡圈外,造成各樣品混合,如要增加樣品吸附量,可在一次點樣干燥后,再進行第2次點樣。
2 膜包被后,一定要封閉確實,防止抗原或抗體的非特異性吸附,避免膜本底染色過深。
3 結果判定時,應與陰、陽性對照斑點反復比較,
ELISA試劑盒盡量克服肉眼觀察所帶來的誤差。

 

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